免疫濁度分析方法

來源：http://www.attrakmagnet.com/ 作者：余氯檢測儀 時間：2018-12-24

　　【關(guān)鍵詞】 免疫濁度分析;鉤狀效應(yīng)

　　在免疫濁度分析中，抗原、抗體形成的沉淀量起初隨著樣本濃度的增加而增加，但當(dāng)樣本濃度過高時，沉淀量隨著樣本濃度的增加反而減少，使反映信號弱化，信號-劑量(濃度)曲線呈鉤狀現(xiàn)象，而儀器是據(jù)沉淀量蟬翼的濁度計算結(jié)果的，因此當(dāng)樣本濃度過高，測出的結(jié)果必然不準(zhǔn)確。為此，我們以ApoA1為例，通過對儀器試劑測量范圍極限值上限和儀器自動稀釋重做功能進(jìn)行設(shè)置，探討免疫濁度分析中鉤狀效應(yīng)的防范。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料 選取我院2004年4～12月門診及住院樣本中ApoA1超過測量范圍上限的樣本12例。儀器及試劑采用OLYMPUS AU400生化分析儀和浙江伊利康生物技術(shù)有限公司試劑(批號：04112)。校準(zhǔn)液及質(zhì)控品采用浙江伊利康生物技術(shù)有限公司校準(zhǔn)液(批號：04112)和北京中生北控物公司質(zhì)控產(chǎn)品(批號：022321)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 儀器校準(zhǔn) 每周用伊利康校準(zhǔn)液對OLYMPUS AU400生化分析儀校正1次。

　　1.2.2 質(zhì)量控制 中生公司控品在OLYMPUS AU400上每日進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，用平時建立的質(zhì)控圖對質(zhì)控結(jié)果進(jìn)行監(jiān)測，當(dāng)質(zhì)控結(jié)果符合要求后方可開始本樣本測定。

　　1.2.3 實驗方法 首先對儀器的試劑測量范圍上限和儀器自動稀釋重做功能進(jìn)行設(shè)置，然后對設(shè)置前超過測量范圍上限的樣本進(jìn)行設(shè)置前后測定值比較并進(jìn)行配對資料的符號秩和檢驗。

　　1.2.4 儀器設(shè)置 ApoA1試劑測量范圍極限值(Dynanic)上限設(shè)為2.20，自動重復(fù)(Auto repeat)和重復(fù)數(shù)據(jù)覆蓋(Repeat Data Overwrite)都選擇Yes，稀釋或模式(Diluted OR Mode)中選中F，特殊重復(fù)(Repeat special)中實驗項目(Test Name)選擇為ApoA1,稀釋(Diluted)樣本體積(Sample Volume)仍設(shè)為2，系統(tǒng)(System)下試驗申請(Test Requisition)中常規(guī)(Routine)設(shè)為架子編號方式(Rack NO.)，自動/標(biāo)準(zhǔn)重復(fù)(Auto/Standard Repeat)設(shè)為Auto。

　　1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)比較采用秩和檢驗和t檢驗。

　　2 結(jié)果

　　對儀器試劑測量范圍極限值上限和儀器自動稀釋重做。

　　對樣本儀器設(shè)置前后測定值進(jìn)行配對資料的符號秩和檢驗，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05=，儀器設(shè)置后測定組與設(shè)置前且人工對倍稀釋測定組測定值進(jìn)行配對資料t檢驗，其差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

　　3 討論

　　試劑的檢測范圍是0.50～2.20 g/L，當(dāng)樣本濃度超過2.20 g/L時檢測出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)，則應(yīng)將樣本人工或儀器自動做1∶1稀釋后測定，因此將測量范圍極限值上限設(shè)為2.20 g/L，本研究主要探討儀器自動稀釋功能。當(dāng)測定樣本濃度大于4.40 g/L時，即使通過儀器自動稀釋(因設(shè)置對倍稀釋)后的測定樣本濃度讓大于測量范圍極值上限2.20 g/L的檢測同樣存在鉤狀效應(yīng)，因此，當(dāng)樣本濃度高于4.40 g/L，通過儀器自動稀釋功能測定的樣本結(jié)果與樣本真值之間仍存在較大的差異，此時必須加大樣本的稀釋倍數(shù)。

　　通過對儀器設(shè)置前超過測量范圍上限的樣本進(jìn)行設(shè)置前后測定值比較可知，ApoA1低于4.40 g/L的樣本在儀器設(shè)置前后測定值差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);通過對儀器設(shè)置后測定組與設(shè)置前且人工對倍稀釋測定組測定值無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)及免疫濁度分析原理可知，設(shè)置后測定組比設(shè)置前測定組樣本測定值更接近樣本真值。

　　通過儀器的設(shè)置，濃度低于4.40 g/L的ApoA1樣本，儀器均可以自動測定，不需要每個樣本專門添加復(fù)原來檢測是否存在鉤狀現(xiàn)象，不用在儀器不報警的情況下人工檢查結(jié)果或結(jié)果標(biāo)記，不用人工稀釋樣本，操作簡便、準(zhǔn)確。

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